- Horatio Caines fru, Marina, spelad av Sofia Milos: Marina Caim var Horatios fru under de tidiga säsongerna av programmet. Hon var ursprungligen en privatdetektiv som hjälpte Horatio i vissa fall. Men deras äktenskap föll så småningom isär på grund av Horatios hängivenhet till sitt arbete.
- Calleigh Duquesne, spelad av Emily Procter: Calleigh Duquesne är en CSI Level 3 och dotter till en Miami-polis. Hon är en skicklig kriminaltekniker och är känd för sin expertis inom DNA-analys och skjutvapenidentifiering.
- Natalia Boa Vista, spelad av Eva LaRue: Natalia Boa Vista går med i laget i säsong 5 som CSI Level 2. Hon är en före detta undercover-polis och har en bakgrund inom psykologi, vilket hjälper henne att förstå brottslingarnas motiv.
- Delkos fru, Marisol Delko, spelad av Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko är Eric Delkos fru. De gifter sig i säsongsfinalen av säsong 4. Marisol arbetar också som morddetektiv i Miami.
- Yelina Salas, spelad av Sofia Vassilieva: Yelina Salas går med i laget i säsong 9. Hon är dotter till en rysk gangster och har kunskap om kriminella organisationers inre funktioner.