Kirby-Bauer-tekniken är en mikrobiologisk standardmetod som används för att bestämma bakteriers mottaglighet för antimikrobiella medel. Det innebär att mäta zonen för hämning av bakterietillväxt runt antibiotikaimpregnerade skivor placerade på en agarplatta inokulerad med testorganismen. Här är de allmänna stegen för Kirby-Bauer-tekniken:
1. Beredning av inokulum :
- En renkultur av testbakteriestammen erhålls och odlas i ett lämpligt buljongodlingsmedium för att uppnå logaritmisk tillväxtfas (turbiditet).
- Bakteriesuspensionen är standardiserad till en specifik grumlighet, vanligtvis motsvarande en 0,5 McFarland grumlighetsstandard, för att säkerställa en konsekvent inokulumdensitet.
2. Ympning av agarplatta :
- Sterila agarplattor som innehåller Mueller-Hinton-agar eller annat lämpligt agarmedium används för testet.
- Med hjälp av en steril bomullspinne sprids det standardiserade inokulatet jämnt över agarplattans yta för att skapa en sammanflytande gräsmatta av bakterietillväxt.
- Den inokulerade plattan får torka i några minuter för att absorbera överflödig fukt.
3. Applicering av antibiotikadiskar :
- Sterila antibiotikaskivor som innehåller specifika koncentrationer av antimikrobiella medel placeras på ytan av agarplattan med jämnt fördelade intervall med hjälp av steril pincett eller en diskdispenser.
- Skivorna pressas försiktigt för att säkerställa god kontakt med agarytan utan att skada skivorna.
4. Inkubation :
- Den inokulerade plattan med antibiotikaskivor inkuberas vid en lämplig temperatur (vanligtvis 35-37°C) under en specificerad period (vanligtvis 16-24 timmar) för att möjliggöra bakterietillväxt och spridning av antimikrobiella medel.
5. Mätning av hämningszoner :
- Efter inkubation undersöks plattorna för förekomst av hämningszoner runt antibiotikaskivorna.
- Med hjälp av en linjal eller en digital bromsok mäts diametern för varje hämningszon i millimeter.
- Zondiametern indikerar testorganismens känslighet för det specifika antibiotikumet.
6. Tolkning av resultat :
- De uppmätta zondiametrarna jämförs med standardiserade tabeller eller riktlinjer, såsom de som tillhandahålls av Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), för att fastställa testorganismens känslighet eller resistens mot de testade antimikrobiella medlen.
- Organismer kategoriseras som mottagliga, intermediära eller resistenta baserat på storleken på hämningszonerna och fastställda tolkningskriterier.
7. Kvalitetskontroll :
- För att säkerställa noggrannheten och tillförlitligheten hos Kirby-Bauer-tekniken, ingår kvalitetskontrollstammar med kända känslighetsmönster i varje testsats för att övervaka metodens prestanda och de reagenser som används.
Det är viktigt att följa standardiserade procedurer och tolka resultat enligt fastställda riktlinjer för att få tillförlitlig och kliniskt relevant information från Kirby-Bauers antibiotikakänslighetstest.