I pjäsen Macbeth spelar Lady Macbeth en avgörande roll i kung Duncans död. Det är hon som övertygar Macbeth att mörda kungen, och hon hjälper honom att planera och genomföra dådet.
Efter att Macbeth uttryckt sina tvivel och farhågor om att döda kungen, förtalar Lady Macbeth honom för att han är en fegis och skämmer ut honom för att begå brottet. Hon påpekar att han redan har haft idén att döda Duncan och att han bara tvekar på grund av sin "svaga natur". Hon påminner honom också om hans ambition att bli kung och säger till honom att han måste vara hänsynslös om han vill uppnå sina mål.
Lady Macbeths beslutsamhet och manipulation övertygar så småningom Macbeth att gå med på hennes plan. Hon redogör för detaljerna kring mordet, inklusive hur och när det ska göras. Hon säger också till Macbeth att lämna de blodiga dolkarna vid Duncans kropp så att skulden faller på kungens vakter.
Efter att mordet har begåtts är Lady Macbeth till en början övertygad om att de kommer att kunna dölja det. Hon börjar dock snart visa tecken på skuld och galenskap. Hon blir besatt av blodet på händerna och kan inte sova. Hon börjar också få visioner av Duncans spöke, som anklagar henne för mord.
Lady Macbeths skuld blir så småningom för mycket för henne att bära. Hon dör i den fjärde akten av pjäsen, och hennes död är en vändpunkt för Macbeth. Han blir ännu mer hänsynslös och tyrannisk, och så småningom tappar han förståndet.
Lady Macbeths roll i kung Duncans död är betydelsefull eftersom den belyser ambitionens kraft och farorna med att låta ens önskningar övervinna deras moraliska principer. Hon är en komplex och tragisk karaktär som i slutändan förstörs av sin egen ambition och skuld.