Obesvarad kärlek är ett återkommande tema i pjäsen, eftersom flera karaktärer är kära i någon som inte ger tillbaka sina känslor. Viola är till exempel kär i Duke Orsino, som är kär i Olivia. Olivia är i sin tur kär i Cesario (som egentligen är Viola i förklädnad). Detta skapar en komplex väv av obesvarad kärlek som driver mycket av pjäsens action och humor.
Felaktig identitet är också en nyckelfunktion i pjäsen. Viola klär ut sig till en man som heter Cesario för att komma in i Orsinos tjänst. Denna förklädnad leder till ett antal missförstånd och komplikationer, eftersom andra karaktärer misstar Viola för en man och blir kära i henne. Den felaktiga identiteten skapar också möjligheter för Viola att observera och kommentera de andra karaktärerna, vilket bidrar till pjäsens humor.
Sammantaget är obesvarad kärlek och felaktig identitet två nyckelfunktioner som bidrar till humorn och komplexiteten i Twelfth Night.