Raden "Sov inte mer!" har flera lager av betydelse i pjäsen. På en nivå är det helt enkelt Macbeths kommando till hela hushållet att hålla sig vaken och vara på vakt, eftersom han är rädd att något har gått fel. Men raden bär också djupare innebörder och förebådar de kommande händelserna.
För det första raden "Sov inte mer!" kan ses som en metafor för förlusten av oskuld och början på Macbeths nedstigning i mörkret. Fram till denna punkt i pjäsen har Macbeth kämpat med sitt samvete och visat ånger för sina handlingar. Men genom att uttala raden "Sov inte mer!", förvisar han i praktiken sömnen och, med den, varje chans till förlossning. Denna linje markerar en vändpunkt i Macbeths karaktär och symboliserar hans omfamning av ondskan.
För det andra, raden "Sov inte mer!" är en kraftfull förbannelse som Macbeth kastar över sig själv och hela hushållet. Genom att förvägra sig själv och de andra möjligheten att sova skapar Macbeth ett tillstånd av evig oro och oro. Sömn förknippas ofta med frid, återhämtning och det undermedvetna, och genom att beröva sig själv det sätter Macbeth scenen för den mentala och känslomässiga kaos som kommer att följa. Frasen antyder alltså att det inte kommer att finnas något andrum från skulden, rädslan och paranoian som Macbeth upplever.
För det tredje, raden "Sov inte mer!" förebådar det störande sömngångsavsnittet som Lady Macbeth kommer att uppleva senare i pjäsen. När Macbeth blir allt mer upptagen av sin skuld, börjar Lady Macbeth lida av sömngångar och mardrömmar, under vilka hon ständigt upprepar frasen "Out, damned spot!" (Akt 5, Scen 1). Denna rad, på sätt och vis, ekar Macbeths tidigare kommando, och betonar den sömnlöshet och mentala ångest som har drabbat paret.
Avslutningsvis raden "Sov inte mer!" är ett avgörande ögonblick i Macbeth som signalerar Macbeths förvandling till en hänsynslös och skuldtyngd individ. Den fungerar som en metafor för förlusten av oskuld, en kraftfull förbannelse och en förebild om framtida olyckor som väntar Macbeth och hans omgivning.