- Elizabeth Shaw: En ung vetenskapsman som ingår i besättningen på rymdskeppet Prometheus. Hon drivs av sin tro att hitta ingenjörerna, mänsklighetens skapare.
- David: En android som också är medlem i Prometheus besättning. Han är mycket intelligent och nyfiken, men också hänsynslös och beräknande.
- Weyland: VD:n för Weyland Corp., företaget som finansierade Prometheus-expeditionen. Han är besatt av att hitta ingenjörerna och få odödlighet.
- Meredith Vickers: Weyland Corp.s representant på Prometheus. Hon är en hänsynslös och ambitiös affärskvinna som är villig att göra allt för att nå sina mål.
- Janek: Kaptenen på Prometheus. Han är en veteranastronaut som försöker hålla sin besättning säker samtidigt som han uppfyller uppdragets mål.
- Holloway: En biolog på Prometheus som är Shaws romantiska partner. Han är fascinerad av ingenjörerna och deras skapelser.
- Fifield: En geolog på Prometheus som är ivrig att utforska den främmande månen. Han är hänsynslös och impulsiv och sätter ofta sig själv och sina besättningskamrater i fara.