En polyakrylamidgel är beredd med spår i den. Gelén bildas genom att hälla en het vätska polyakrylamidlösning i en grund låda . Lådan ska innehålla en kamliknande struktur med tänder som pekar ner i lösningen . Polyakrylamiden blir en gel snart efter den har gjutits och kammen avlägsnas för att frilägga rektangulära hål .
Natriumdodecylsulfat (SDS)
Proteinet behandlas med natriumdodecylsulfat (SDS ) för att denaturera de subenheter av ett stort protein så att varje en kan mätas separat. Fördelarna med detta är att den SDS ger polypeptidema en negativ laddning , så att de kommer att migrera mot den negativa änden , eller anod , av gelén. För det andra ser till att alla subenheter kommer att ha samma laddning och därmed alla kommer att gå över i gelén enligt deras molekylmassor i stället för avgifter SDS . Addera Tillsats av protein
En liten mängd av DNA eller protein är placerad i ett av de rektangulära hålen vid en ände av gelén. En elektrisk ström leds genom gelén vid neutralt pH. Cirka 10 mikroliter av en DNA-stege liksom två kontroller är också laddas in i gelén. DNA- stege används för att möjliggöra mätning av hur långt provet flyttas i färd med elektrofores .
Elektrofores
Maskinen sätts på till 100 volt och låt löpa under 30 minuter. Efter proven har elektrofores under 30 minuter , är gelén tillsammans med en bricka avlägsnas och placeras i en färgnings bricka under cirka tre minuter. Detta följs sedan genom att placera gelén i varmt vatten i fem minuter. Gelen är nu redo att släppas ut på den ljuslåda för att observera rörelsen av DNA-fragment.
Andra överväganden
När du visar gelen under ljuset bör vissa viktiga saker beaktas . En cell kan vara antingen heterozygot eller homozygot för den gen beroende på om kopian är närvarande eller inte är närvarande i båda kopiorna eller bara en. Den heterozygot Resultatet kan visas som ett enda band , eftersom de segment av DNA som förstärks verkar mer effektivt mörkare i gelén . Ett färgämne tillsätts också så att varje polypeptid kan ses både under och efter elektrofores . Addera